Farmacogenómica de etanercept, infliximab, adalimumab y metotrexato en artritis reumatoide. Revisión estructurada / Pharmacogenomics of etanercept, infliximab, adalimumab and methotrexate in rheumatoid arthritis. A structured review

RESUMEN Introducción: La variabilidad genética individual favorece que la capacidad de respuesta y toxicidad a los fármacos sea diferente en cada persona. En la artritis reumatoide se reportan índices de respuesta a los medicamentos etanercept, infliximab, adalimumab y metotrexato cercanos al 60%. Esta variabilidad puede explicarse por polimorfismos genéticos característicos de cada paciente. Objetivo: Identificar polimorfismos genéticos reportados en artículos científicos que pueden afectar la farmacocinética y la farmacodinámica de etanercept, infliximab, adalimumab y metotrexato, y su respuesta en pacientes con artritis reumatoide. Materiales y método: Se realizó una búsqueda sistemática en PubMed/Medline, con los términos clave: «rheumatoid arthritis¼ and «pharmacogenomic¼ and «polymorphisms¼ and «metotrexato¼ and «infliximab¼ and «adalimumab¼ and «etanercept¼ obteniendo 164 artículos, 117 no duplicados y 19 artículos que cumplieron los criterios de inclusión. Resultados: De los 19 artículos, 2 reportaron polimorfismos que afectan la farmacocinética de infliximab, adalimumab, etanercept y metotrexato, y 17, la farmacodinámica. En los 19 artículos se identificaron 23 polimorfismos de relevancia clínica en población europea, japonesa, jordana e india. Conclusiones: Se identifican 23 polimorfismos de relevancia clínica, los cuales podrían ser el soporte para el diseño de un test de secuenciación específica en pacientes con artritis reumatoide, en los que se considere la utilización de infliximab, adalimumab, etanercept o metotrexato. La utilidad práctica de este tipo de estrategia requiere ser evidencia en estudios clínicos específicos, relacionados con una prescripción orientada por test genéticos y personalizada, y su efecto sobre la efectividad y seguridad de la farmacoterapia con estos medicamentos.

ABSTRACT Introduction: Individual genetic variability favours the capacity of response and toxicity to the drugs is different in each person. Rheumatoid arthritis reported rates of response to the drugs etanercept, infliximab, adalimumab and methotrexate is close to 60%. This variability can be explained by genetic polymorphisms characteristic of each patient. Objective: To identify genetic polymorphisms reported in scientific articles that may affect the pharmacokinetics and pharmacodynamics of etanercept, infliximab, adalimumab, and methotrexate, and their response in patients with rheumatoid arthritis. Materials and method: A systematic search was performed in PubMed and Medline, with the key terms: "rheumatoid arthritis" and "pharmacogenomic" and "polymorphisms" and "methotrexate" and "infliximab" and "adalimumab" and "etanercept", obtaining 164 articles, 117 non-duplicates, and 19 articles that met the inclusion criteria. Results: Of the 19 articles, 2 reported polymorphisms affecting the pharmacokinetics of infliximab, adalimumab, etanercept, methotrexate, and 17, pharmacodynamics. In the 19 articles, 23 polymorphisms of clinical relevance were identified in European, Japanese, Jordanian, and Indian populations. Conclusions: A total of 23 polymorphisms with clinical relevance were identified, which could be the basis for the design of a specific test sequencing in rheumatoid arthritis patients being considered for treatment with infliximab, adalimumab, etanercept, or methotrexate. The practical usefulness of this strategy requires evidence in specific clinical studies, associated with a targeted and personalised genetic test, and its effect on the effectiveness and safety of drug therapy with these drugs prescription.

Diagnóstico molecular de las infecciones neurológicas por herpes virus en pacientes de la ciudad de Medellín / Molecular diagnosis of neurological herpes virus infection in patients from Medellin / Diagnóstico molecular das infecções neurológicas por herpes virus em pacientes da cidade de Medellín

Objetivo: describir la frecuencia, y el comportamiento clínico y de laboratorio de las infecciones por citomegalovirus (CMV), virus Epstein-Barr (EBV) y virus herpes simplex 1 y 2 (HSV 1 y HSV 2) en el sistema nervioso central tanto en pacientes inmunocomprometidos como inmunocompetentes. Metodología: se analizaron 204 líquidos cefalorraquídeos con el uso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, de su sigla en inglés) en tiempo real como herramienta diagnóstica molecular para la detección de infección. Resultados: un 16% de los líquidos cefalorraquídeos es positivo para alguno de los virus estudiados, el EBV se detectó en el 22.8% de los casos positivos y se ubica por encima de las infecciones ocasionadas por HSV y CMV. El 61.9% de los pacientes con resultado positivo tenía algún tipo de inmunocompromiso. onclusiones: la utilización de la PCR en tiempo real permite establecer el agente causal de infección en el sistema nervioso central y es de gran ayuda en los pacientes inmunocomprometidos en los que las variaciones clínicas y de laboratorio no son concluyentes. Esto permitiría la implementación de una terapia específica.

Objective: To describe the frequency and the clinical and laboratory characteristics of infections with cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr (EBV) and herpes simplex virus 1 and 2 (HSV 1 and HSV 2) in central nervous system in both immunocompetent and immunocompromised patients. Methods: A total of 204 cerebrospinal fluid samples were tested for CMV, EBV or HSV 1 and 2 using real time PCR as a molecular diagnostic tool for detection of infection. Results: Sixteen percent of cerebrospinal fluid was positive for at least one of the viruses, and Epstein Barr virus was detected in 22.8% of cases, which is above the infections caused by HSV and CMV. 61.9% of positive patients had some form of immune compromise. Conclusions: The use of real-time PCR identifies the causative agent of infection in the central nervous system and is of great help in immunocompromised patients where clinical and laboratory variations are inconclusive; this will also help to implement a specific therapy.

Objetivo: descrever a frequência, e o comportamento clínico e de laboratório das infecções por citomegalovírus (CMV), vírus Epstein-Barr (EBV) e vírus herpes simplex 1 e 2 (HSV 1 e HSV 2) no sistema nervoso central tanto em pacientes imuno-comprometidos como imuno-competentes. Metodologia: analisaram-se 204 líquidos cefalorraquídianos utilizando a reação em corrente da polimerase (PCR, de sua sigla em virilhas) em tempo real como ferramenta diagnostica molecular para a detecção de infecção. Resultados: um 16% dos líquidos cefalorraquídianos foram positivos para algum dos vírus estudados, o EBV se detectou no 22.8% dos casos positivos localizando-se acima das infecções ocasionadas por HSV e CMV. O 61.9% dos pacientes com resultado positivo tinha algum tipo de imuno-compromisso. Conclusões: a utilização da PCR em tempo real permite estabelecer o agente causal de infecção no sistema nervoso central sendo de grande ajuda nos pacientes inmunocomprometidos onde as variações clínicas e de laboratório não são concludentes e isto permitiria a implementação de uma terapia específica.

Cultivo de células madre limbares en membrana amniótica para reconstrucción de tejido corneal: una comparación de dos métodos / Limbal stem cell culture on amniotic membrane for corneal tissue reconstruction: a comparison of techniques / Cultivo de células mãe limbares em membrana amniótica para reconstrução de tecido corneano: uma comparação de dois métodos

Objetivo: Obtener un cultivo celular de células del limbus corneal en membrana amniótica como soporte por dos métodos diferentes, suspensión y explante, para obtener datos de confluencia, viabilidad y diferenciación en ambos métodos. Métodología: Muestras de LSC (limbal stem cells, por sus siglas en inglés) fueron obtenidas de 16 donantes cadavéricos. Se realizaron seis cultivos de cada muestra, 3 por el método de suspensión y 3 por el método de explante, todo por triplicado. Como control negativo se utilizó membrana amniótica sin LSCs. Las células fueron cultivadas con SHEM, 37°C, 5% CO2 y 95% de humedad. Los cultivos fueron mantenidos por 14 días con un recambio de medio cada 3 días. El día 14 los cultivos fueron analizados para evaluar viabilidad con azul de tripano, confluencia por microscopio y la diferenciación celular con Inmunohistoquímica para detectar citoqueratina 3/12. Resultados: Como resultado de los experimentos mencionados anteriormente, para los métodos de suspensión y explante, se encontró una viabilidad de 98.92% y 98.32%, una confluencia de 55.95% y 48.27%, una concentración celular de 38.83x104 células/ml y 36.484x104 celulas/ml, y una diferenciación de 22.93% y 16.55%, respectivamente. Conclusiones: Aunque éste estudio compare dos métodos, cultivos en suspensión de LSC y cultivo en explante de LSC, ambos con membrana amniótica como soporte, nosotros encontramos una pequeña diferencia en ellos. Como resultado, el cultivo en suspensión fue mejor que el explante, sin embargo los resultados no son conclusivos, por lo tanto es necesario realizar más investigaciones en este campo para lograr una conclusión con respecto al desempeño de estos dos métodos.

Objective: To grow cells on amniotic membrane corneal limbus with two different methods to assess the confluence, viability and differentiation of both.Methods: LSC samples were obtained from 16 deceased donors. Additionally, six cultures were made from each sample, 3 by LSC suspension method and 3 by LSC explant method, all in triplicate. Furthermore, AMs without oral mucosal cells were used as negative control cultures. The cells were seeded with SHEM, 37°C, 5% CO2, 95% humidity. Moreover, the cultures were maintained for 14 days and the culture medium was changed every other day or every 3 days. Also, on the 14th day, the cultures were analyzed to evaluate viability with trypan blue, confluence with microscopy and cell differentiation with immunohistochemistry to detect cytokeratin 3/12.Results: As a result of the experiments mentioned above, for suspension and explant cultures, we found a viability of 98.92% and 98.32%, a confluence of 55.95% and 48.27%, a final cellular concentration of 38.83x104 cells/ml and 36.484x104 cells/ml, and a differentiation of 22.93% and 16.55%, respectively.Conclusions: Although this study compared two methods, LSC suspension culture and LSC explant culture, both with AM as scaffold, we did find a slight difference between them. As a result, the suspension culture was better than the LSC explant culture, but the results are not conclusive. It is necessary to conduct more research in this field to reach a conclusion regarding the behavior of these two methods

Objetivo: Obter um cultivo celular de células do limbus corneano em membrana amniótica como suporte por dois métodos diferentes, suspensão e explante, para obter dados de confluência, viabilidade e diferenciação em ambos métodos. Métodos: Mostras de LSC (limbal stem cells, por suas siglas em inglês) foram obtidas de 16 doadores cadavéricos. Realizaram-se seis cultivos de cada mostra, 3 pelo método de suspensão e 3 pelo método de explante, tudo por triplicado. Como controle negativo se utilizou membrana amniótica sem LSCs. As células foram cultivadas com SHEM, 37°C, 5% CO2 e 95% de umidade. Os cultivos foram mantidos por 14 dias com uma troca de meio cada 3 dias. O dia 14 os cultivos foram analisados para avaliar viabilidade com azul de tripan, confluência por microscópio e a diferenciação celular com Imunoistoquímica para detectar citoqueratina 3/12. Resultados: Como resultado dos experimentos mencionados anteriormente, para os métodos de suspensão e explante, encontrou-se uma viabilidade de 98.92% e 98.32%, uma confluência de 55.95% e 48.27%, uma concentração celular de 38.83x104 células/ml e 36.484x104 células/ml, e uma diferenciação de 22.935% e 16.558%, respectivamente. Conclusão: Ainda que este estudo compare dois métodos, cultivos em suspensão de LSC e cultivo em explante de LSC, ambos com membrana amniótica como suporte, nós encontramos uma pequena diferença neles. Como resultado, o cultivo em suspensão foi melhor do que o explante, no entanto os resultados não são conclusivos, portanto é necessário realizar mais investigações neste campo para conseguir uma conclusão com respeito ao desempenho destes dois métodos

Características operativas de las pruebas de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real y la amplificación isotérmica mediada por Asas en la detección de tuberculosis pulmonar: una revisión sistemática / Operative characteristics of real time polymerase chain reaction and loop mediated isothermal amplification in the detection of pulmonary tuberculosis: a systematic review

Objetivo: exponer las características operativas de las pruebas de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) y la Amplificación isotérmica mediada por Asas (LAMP) para el diagnóstico de tuberculosis pulmonar causada por miembros del complejo Mycobacterium tuberculosis. Metodología: revisión sistemática de la literatura científica publicada durante los años 2005 a 2009, de la prueba LAMP comparada con la qPCR para el diagnóstico de tuberculosis pulmonar. Resultados: los hallazgos muestran sensibilidades de la prueba LAMP que fluctúan entre 94.1% – 100%, comparado con un 85.2% a 86.3% para la prueba qPCR, y unas especificidades entre 94.2 – 100% para LAMP frente a 88.6% – 100% de la qPCR. Conclusiones: estos hallazgos demuestran la importancia de evaluar dicha metodología en nuestra región para mejorar el diagnóstico de esta enfermedad.

Evaluación de tres métodos moleculares para el rastreo e identificación de HER2/neu en pacientes con cáncer de mama / Evaluation of three molecular methods for tracking and identifying HER2/neu oncogene in breast cancer patients

Objetivo: comparar las técnicas de IHQ, FISH y PCR cuantitativa en tiempo real, en la determinación de la amplificación ysobre-expresión de HER2/neu en 70 tumores de mama. Metodología: se evaluaron las características operativas de la IHQ HercepTest y la PCR cuantitativa en tiempo real. Paraello se tomó como estándar de oro la hibridización fluorescente in situ. Se determinó el porcentaje de positividad de tumores de mama que tienen amplificación génica de HER2/neu.Resultados: el 38% de tumores de mama muestra amplificación para HER2/neu, de acuerdo con la PCR en tiempo real. Se encontró una concordancia del 80% entre la PCR en tiempo real y la FISH en los casos catalogados como equívocos grado2+ por IHQ. Conclusión: los resultados obtenidos sugieren que los análisis por PCR en tiempo real son una alternativa válida en casos en los que se pueda usar la técnica de FISH para la reevaluación de los tumores de mama catalogados equívocos o grado 2+para HER2/neu por IHQ. Mediante la combinación de la IHQ y la PCR cuantitativa en tiempo real se puede llegar a una buena aproximación en la determinación de los grados expresión y amplificación de HER2/neu en pacientes con cáncer de mama.

Objective: to compare IHC, FISH and quantitative real-time PCR techniques, in the determination of HER2/neu oncogene amplification and overexpression in 70 breast cancer patients. Methods: we evaluated the performance of the IHC HercepTest and quantitative real-time PCR techniques, using as a gold standard the fluorescent in situ hybridization technique. We determined the positivity percentage of the breast neoplasms that have the amplification for HER2/neu oncogene.Results: 38% of breast tumors demonstrate amplification of HER2/neu oncogene according to real-time PCR and we found an 80% concordance for real-time PCR and FISH in cases classified as equivocal or grade 2+ with IHC. Conclusion: the results of this study suggest that the analysis by real-time PCR is a valid alternative in cases when it is not possible to use the FISH technique for reassessment of breast neoplasms classified as equivocal or grade 2+ for HER2/neu with IHC. The combination of IHC and quantitative real-time PCR may be a good approach in the determination of the expression and amplification status of HER2/neu in breast cancer patients.